高效液相色譜儀常見故障處理方法分析（一）--柱壓問題
柱壓問題
柱壓問題是使用高效液相色譜儀過程中需要密切注意的地方，柱壓的穩(wěn)定與色譜圖峰形的好壞、柱效、分離效果及保留時間等密切相關。所謂柱壓穩(wěn)定并不是指壓力值穩(wěn)定于一個恒定值而是指壓力波動范圍在50 PSI(3.3 Bar)之間(在使用梯度洗脫時，柱壓平穩(wěn)緩慢的變化是允許的)。壓力過高、過低都屬于柱壓問題。
壓力過高
這是高效液相色譜儀在使用中最常見的問題，指的是壓力突然升高，一般都是由于流路中有堵塞的原因。此時，我們應該分段進行檢查。
1)首先斷開真空泵的入口處，此時PEEK管里充滿液體，使PEEK管低于溶劑瓶，看液體是否自由滴下，如果液體不滴或緩慢滴下，則是溶劑過濾頭堵塞。
處理方法：用30%的硝酸浸泡半個小時，在用超純水沖洗干凈。如果液體自由滴下，溶劑過濾頭正常，再檢查;
2)打開Purge閥，使流動相不經(jīng)過柱子，如果壓力沒有明顯下降，則是過濾白頭堵塞。
處理方法：將過濾白頭取出，用10%的異丙醇超聲半個小時。如果壓力降至100 PSI(6.7 Bar)以下，過濾白頭正常，再檢查;
3)把色譜柱出口端取下，如果壓力不下降，則是柱子堵塞。
處理方法：如果是緩沖鹽堵塞，則用95%的水沖至壓力正常。如果是一些強保留的物質(zhì)導致堵塞，則要用比現(xiàn)在流動相更強的流動相沖至壓力正常。假如按上面的方法長時間沖洗壓力都不下降，則可考慮將柱子的進出口反過來接在儀器上，用流動相沖洗柱子。這時，如果柱壓仍不下降，只有換柱子入口篩板，但一旦操作不甚，很容易造成柱效下降，所以盡量少用。
壓力過低
1)壓力過低的現(xiàn)象一般是由于系統(tǒng)泄漏，處理方法：尋找各個接口處，特別是色譜柱兩端的接口，把泄漏的地方旋緊即可;
2)當然還有一個原因就是泵里進了空氣，但此時表現(xiàn)的往往是壓力不穩(wěn)，忽高忽低，更嚴重一點會導致泵無法吸上液體。處理方法：打開Purge閥，用3~5 ml/min的流速沖洗，如果不行，則要用專用針筒在排空閥處借住外力將氣泡吸出。
漂移問題
主要包括基線漂移和保留時間漂移。
基線漂移
一般說來，機器剛起動時，基線容易漂移，大概要半個小時的平衡時間，如果你用了緩沖溶液或緩沖鹽，還有就是在低波長下(220 nm)平衡時間相對會比較長，但如果你在實驗過程中發(fā)現(xiàn)基線漂移，則你要考慮下面的原因：
1)柱溫波動。解決方法：控制好柱子和流動相的溫度，檢查是否有打開的窗戶或空調(diào)對著柱溫箱;
2)流通池被污染或有氣體。 解決方法：用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池(最好斷開柱子)。如有需要，可以用1N的硝酸(不要用鹽酸);
3)紫外燈能量不足。
解決方法：更換新的紫外燈;
4)流動相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成。
解決方法：檢查流動相的組成，使用高品質(zhì)的化學試劑及HPLC級的溶劑;
5)樣品中有強保留的物質(zhì)(高K’值)以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現(xiàn)出一個逐步升高的基線。
解決方法：使用保護柱，如有必要，在進樣之間。在分析過程中，定期用強溶劑沖洗柱子;
6)檢測器沒有設定在最大吸收波長處。解決方法：將波長調(diào)整至最大吸收波長處;
7)流動相的PH值沒有調(diào)節(jié)好。解決方法：加適量的酸或堿調(diào)至最佳PH值。
